İstanbul Muhafızları: Ab-ı Hayat Çeşmesi, Aslı’nın Gümüşçüler Çarşısı’nda gizli bir hazineyi araştırırken yaşadığı macerayı anlatıyor. Aslı, yeni bölüm için malzeme toplamak üzere Veli Dede’nin dükkânına gider. Burada, İstanbul’un derinliklerinde saklı olan ve yaşlanmayı durduran hayat suyuna dair söylentileri öğrenir. Veli Dede, bu sırrı bilen son kişidir ve konuşmak istemez. Aslı, ipuçlarını takip ederek Murat ve Burcu ile aynı yol üzerinde buluşur. Üçlü, çeşmeye ulaşmak isteyen kişilerin peşine düşer. Bu arada Ayşen, Aslı’nın işi zamanında bitireceğine inanır. Aslı ise İstanbul’un sokaklarında, dükkânlardan yeraltına uzanan bu izleri tek tek toplar.