Operada Bir Gece, Milano’da sahte vaatlerle para koparmaya çalışan Otis B. Driftwood ile operadaki iki genç âşığın başına gelenleri anlatıyor. Otis, zengin bir kadını etkileyip ondan faydalanmaya çalışırken, operada Rosa’nın peşini bırakmayan Lassparri de sahne arkasında sorun çıkarıyor. Rosa, hediyeleri geri çeviriyor ve gönlünü, sesi güçlü ama hakkını alamayan Ricardo’ya kaptırıyor. Ricardo ise sözleşmesi yüzünden operada kalmak zorunda kalıyor, Rosa da Amerika’ya gitmeye hazırlanıyor. Bu ayrılık ikisini zorluyor, ama çevrelerindeki kurnazlık ve baskı işlerini daha da içinden çıkılmaz hale getiriyor. Otis’in planları, Fiorello ve Tomasso’nun karıştığı işler arasında Rosa ile Ricardo’nun yolu sık sık kesiliyor.